优化ELISA的技巧

1. 选择合适的ELISA格式

由于ELISA的设计非常灵活，因此可以根据实验需求进行合适的格式选择。最好使用简单的ELISA格式，这样对成本控制更有利；但是同样的，还需要考虑特异性、干扰等问题。例如，如果是筛选合适的单抗，那么简单的直接或间接ELISA比较合适；如果是在复杂基质中特异性检测目标待测物时，则夹心ELISA是好的选择。如果是检测一些分子量较小，同时关键试剂不好获得时，竞争ELISA则是更好的选择。

关于结合特性，可能是在包被一些特殊蛋白时需考量。如：因通常ELISA包被是利用疏水作用等物理特性包被的，当需要包被的蛋白太小且大部分氨基酸都是亲水氨基酸时，常规的包被方式就不合适，这时候其实也可以更管合适的ELISA板，如处理后的亲水表面ELISA板。

选择合适的包被方式包被主要要考虑的是包被液、温度、浓度、时间等条件。常见的包被液有碳酸盐缓冲液（CBS）和磷酸盐缓冲液（PBS）。CBS pH值在9.6左右，呈弱碱性；PBS pH值在7.4左右，偏中性。包被的蛋白可能会因为一些氨基酸、等电点的原因，导致在碱性条件下包被不理想，可以尝试不同类型的包被液。

包被温度一般有4℃、室温、37℃等条件。一般包被温度和包被时间相配合。一般包被4℃和室温都是过夜包被，而37℃通常2小时左右就可以了。但是一般4℃和室温过夜包被更加稳定充分，且对蛋白保护较好，37℃可能一些蛋白不太稳定，包被均一性可能也有些不确定，在条件允许下，推荐过夜包被。包被浓度的选择一般和板载量和测量格式的适配程度相关，一般通过棋盘进行确认和选择，将会在棋盘条目进行阐述。值得注意的是，一些小蛋白如多肽很难包被，这是可选择对其进行蛋白偶联，常见的偶联物有BSA、KLH、OVA等。

4. 选择合适的封闭液

封闭液的选择关乎到ELISA的整体性能，封闭的目的是包被完成后，将空白位置填补上，防止后续步骤中的任何非目标结合的蛋白结合到板子上，造成干扰和背景信号异常。通常的封闭液都是一些无关蛋白，如BSA、动物血清、脱脂奶粉、酪蛋白等。目前也有一些针对特殊需求的非蛋白封闭剂。当你在进行ELISA检测无论如何进行试剂浓度调整，发现背景信号都很异常时，可能就是封闭液选择不对，就需要分析可能的原因。如封闭液BSA较大，在一些特殊条件下可能不能填补非特异结合的无关蛋白的结合位置，这时候就需要更换成酪蛋白等较小的封闭试剂等。